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ISO 11731:2017 — Ricerca e Conta di Legionella nelle Acque

La norma ISO 11731:2017 definisce il metodo colturale di riferimento per la ricerca, il recupero e la conta di Legionella spp. nelle acque. È l'unico metodo accettato per i controlli ufficiali in Italia secondo le LG ISS 2023.

Aggiornato: 26/07/2026ISO.org

Solo laboratori accreditati ISO 17025

Secondo le LG ISS 2023 le analisi Legionella devono essere eseguite da laboratori con accreditamento ISO/IEC 17025:2018 per il metodo ISO 11731. I rapporti di laboratori non accreditati non hanno valore legale.

Principio del Metodo ISO 11731:2017

1
Prelievo e trasporto
Il campione (500–2.000 mL) viene prelevato in condizioni standardizzate con aggiunta di tiosolfato di sodio (neutralizzazione cloro) e trasportato a 4°C entro 24 ore al laboratorio.
2
Filtrazione o centrifugazione
Il campione viene concentrato tramite filtrazione su membrana (0,2 μm) o centrifugazione (6.000 g × 30 min) per separare le cellule batteriche dal campione d'acqua.
3
Decontaminazione acida
Il concentrato viene trattato con soluzione acida (pH 2,2) per 5 minuti per eliminare la flora batterica concomitante: la Legionella è acido-resistente e sopravvive al trattamento.
4
Coltura su BCYE-α
Il campione viene seminato su terreno BCYE-α (Buffered Charcoal Yeast Extract con L-cisteina) e incubato a 36°C ± 1°C per 10 giorni in atmosfera umida.
5
Conteggio e conferma
Le colonie sospette (grigio-bianche, iridescenti in luce obliqua) vengono contate e confermate tramite test biochimici e/o PCR per Legionella pneumophila sierogruppo 1.

Interpretazione dei Risultati

Risultato (UFC/L)ClassificazioneAzione richiesta
<100 UFC/LConformeNessuna — prossimo campionamento alla scadenza prevista
100–999 UFC/LAllertaMisure preventive, revisione piano, verifica entro 30 gg
1.000–9.999 UFC/LAzioneBonifica obbligatoria (shock termico o clorazione), notifica ASL
≥10.000 UFC/LEmergenzaSospensione uso impianto, bonifica urgente, notifica ASL entro 24h

* Per strutture sanitarie (RSA, ospedali ad alto rischio) il limite di allerta è 100 UFC/L e il limite di azione 500 UFC/L.

ISO 11731 (Coltura) vs PCR — Confronto

CriterioISO 11731 (Coltura)PCR (Molecolare)
Tempi di risposta10–14 giorni24–48 ore
Valore legale (LG ISS 2023)✅ Metodo di riferimento⚠️ Solo come screening
Sensibilità~100 UFC/L~10 cellule/mL (anche morte)
Falsi positiviMolto rariPossibili (cellule morte/DNA residuo)
Uso consigliatoControlli ufficiali, rapporti di provaScreening post-bonifica, emergenze

Domande Frequenti

Perché l'analisi Legionella ISO 11731 richiede 10-14 giorni?

La Legionella pneumophila cresce lentamente anche in condizioni ottimali. L'incubazione su terreno BCYE-α a 36°C per 10 giorni è necessaria per sviluppare colonie visibili e contabili. Non è possibile accelerare questo processo senza rischiare falsi negativi.

Esiste un metodo rapido per la Legionella (meno di 10 giorni)?

I metodi PCR (polymerase chain reaction) danno risultati in 24–48 ore rilevando il DNA di Legionella. Tuttavia la PCR non è accreditata come metodo di riferimento per i controlli ufficiali secondo le LG ISS 2023 — è usata come screening. Per rapporti di prova con valore legale è obbligatorio il metodo colturale ISO 11731.

Il laboratorio deve essere accreditato ISO 17025 specificamente per ISO 11731?

Sì, il laboratorio deve possedere un accreditamento ISO/IEC 17025:2018 con lo scope specifico per il metodo ISO 11731. Non è sufficiente un accreditamento generico per analisi microbiologiche. L'accreditamento si verifica sul sito Accreditamento (www.accredia.it).

Come si interpreta un risultato di 250 UFC/L per Legionella?

Un risultato di 250 UFC/L è in zona allerta per le strutture ricettive (soglia >100 UFC/L) e richiede: notifica ASL, revisione del piano di manutenzione, analisi di verifica entro 30 giorni e misure preventive (aumento temperatura, trattamento biocida). La bonifica urgente scatta sopra 1.000 UFC/L.

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